神经肽P物质调控Notch信号通路对胎鼠高氧肺损伤后Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖的影响
【出 处】:
【作 者】:
蔡莉
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方芳
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杨林
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党红星
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许峰
【摘 要】
【摘要】目的探讨神经肽P物质(SP)对胎鼠高氧肺损伤后Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECI/)增殖的影响及其可能机制。方法取孕18d胎鼠肺组织进行原代AEC11分离培养后分为6组。空气组暴露于含21%的氧舱内;高氧组则暴露于含95%的氧舱内;高氧+SP组、高氧+SP+SP受体拮抗剂L703.606组、高氧+SP+Notch信号通路阻断剂MW167组、高氧+MWl67组在高氧暴露基础上相应加入1μmol/L的SP、0.03mmol/L的L703.606、0.2mmol/L的MW167。干预后4h检测细胞活性,于6、12、18、24h计数细胞并描绘增殖曲线,24h于倒置显微镜下观察细胞形态及增殖情况并检测细胞周期;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT—qPCR)检测Notch信号通路配体Dll1、D114以及靶基因Hes1的mRNA表达。结果经高氧或Notch信号通路阻断剂MW167处理后,各组细胞计数均较空气组明显减少,且细胞活性明显降低,出现G1期阻滞现象,细胞增殖能力明显受抑;镜下可见核固缩、胞内颗粒物减少等变化;同时Notch通路相关基因Dll1、D114、Hes1的mRNA表达量明显下降。与高氧组比较,SP干预后细胞计数增多,胞内颗粒物质增加,且细胞活性明显升高(A值:75.5±14.9比44.9±8.4),G1期比例降低[(62.87±3.99)%比(67.47±2.28)%]、S期比例升高[(32.54±2.71)%比(25.03±3.52)%],说明细胞增殖能力明显增强(均P〈0.05);同时Dll1、D114、Hes1的mRNA表达量均明显上调(2^-△△Ct:1.44±0.13比0.92±0.04,0.80±0.17比0.35±0.08,1.20±0.09比0.85±0.08,均P〈0.05)。而此时再加入SP受体拮抗剂L703.606或Notch信号通路阻断剂MW167,可再次出现细胞增殖受抑的表现,且细胞活性再次降低(A值:60.0±9.5、37.7±21.7比75.5±14.9),G1期比例增加[(73.96±3.53)%、(92.44±1.75)%比(62.87±3.99)�
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