盐酸刺激与机械牵张对人肺上皮细胞向间质转分化的影响
【出 处】:
【作 者】:
潘莹
[1] ;
毛璞
[2] ;
黄勇波
[1] ;
李建春
[1] ;
许智恒
[1] ;
李希
[1] ;
吴苏龙
[1] ;
施荣华
[1] ;
何为群
[1] ;
刘晓青
[1] ;
黎毅敏
[1]
【摘 要】
【摘要】目的探讨盐酸(HCl)刺激与机械牵张诱导人肺上皮细胞向间质转分化以及对透明质酸(HA)分泌的影响。方法体外培养人肺上皮细胞株BEAS-2B,取对数生长期的细胞分为磷酸盐缓冲液(PBS)+静止组、HCl+静止组、PBS+牵张组、HCl+牵张组。采用FX-5000T细胞应力加载系统向两个牵张组BEAS-2B细胞持续48h施加20%振幅、频率0.33Hz、正弦波的机械牵张。分别于牵张前后用倒置显微镜观察细胞形态变化;用蛋白质免疫印迹试验(WesternBlot)检测细胞上皮标志物E-钙黏蛋白和细胞角蛋白-8(CK-8)以及间质标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中HA分泌量。结果①镜下观察显示:PBS+静止组BEAS-2B细胞呈卵圆形,且细胞紧密相连,细胞间存在极性;单纯HCl刺激后细胞形态无明显变化;而单纯给予机械牵张48h后细胞由卵圆形变成长梭形,细胞间隙明显增大;给予HCl刺激和机械牵张双重打击后细胞形态改变更为显著。②WesternBlot显示:与PBS+静止组比较,单纯或联合HCl和机械牵张48h后BEAS-2B细胞E-钙黏蛋白、CK-8表达均下调,波形蛋白、α-SMA表达均上调,以HCl+牵张组表达变化更为明显[以PBS+静止组表达量(灰度值)为基数1,E-钙黏蛋白为0.16±0.08比1,CK-8为0.10±0.03比1,波形蛋白为3.35±0.38比1,α-SMA为3.10±0.45比1,均P〈0.01]。③ELISA试验显示:与PBS+静止组比较,单纯HCl刺激或机械牵张均可诱导BEAS-2B细胞分泌HA(μg/L:55.763±0.687、63.005±0.493比49.876±1.867);而HCl与机械牵张联合刺激后细胞培养上清液中HA分泌量增加更为显著(μg/L:78.220±1.085比49.876±1.867,P〈0.01)。结论HCl或机械牵张均能诱导人肺上皮细胞发生上皮向间质转分化,同时增加HA的分�
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