长链非编码RNA在脂多糖诱导人巨噬细胞炎症反应中的表达变化
【出 处】:
【作 者】:
邓桢
姚芳苡
叶建青
徐建青
卿城
罗清
黄自坤
南昌大学第一附属医院检验科
江西南昌330006
江西省血液中心检验科
江西南昌333000
南昌大学第一附属医院重症医学科
江西南昌330006
【摘 要】目的 分析长链非编码RNA(lncRNA)在脂多糖(LPS)诱导人巨噬细胞炎症反应中的表达差异.方法 分离健康者外周血单个核细胞,采用贴壁法培养纯化为巨噬细胞并分为空白对照组和LPS刺激组.用1 mg/L LPS刺激巨噬细胞12 h后收集细胞及其培养上清液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素(IL-1β、IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;利用lncRNA基因芯片检测两组细胞中lncRNA表达谱的变化,筛选出差异表达lncRNA分子并进行分析.采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)对部分差异表达lncRNA分子进行验证;并以NR_028034为研究对象,检测LPS诱导巨噬细胞炎症反应中NR_028034的动态表达变化.结果 ① 与空白对照组相比,LPS诱导巨噬细胞12 h后上清液中炎性细胞因子含量均明显升高〔IL-1β(ng/L):562.93±61.17比59.74±15.68,IL-6(ng/L):702.46±92.31比71.66±18.25,TNF-α(ng/L):794.50±63.89比85.12±22.07,均P〈0.01〕,证实巨噬细胞炎症反应模型构建成功.② 以LPS刺激组与空白对照组表达比值≥2倍且P〈0.05作为差异表达lncRNA.LPS刺激巨噬细胞后差异表达lncRNA有1479条,上调2倍以上的lncRNA共953条,其中上调5倍以上的lncRNA有49条;下调2倍以上的lncRNA共526条,其中下调5倍以上的lncRNA有35条.③ 用qRT-PCR对部分lncRNA进行验证的结果与lncRNA芯片检测结果一致.④LPS刺激巨噬细胞后3、6、12 h,NR_028034表达水平较空白对照组分别上调了(4.41±0.65)、(11.56±2.04)、(18.58±1.36)倍(均P〈0.01).结论 LPS诱导人巨噬细胞炎症反应后,lncRNA表达谱发生显著变化,lncRNA可能参与调控了巨噬细胞炎症反应.
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