肝素减轻中性粒细胞胞外诱捕网诱导的内皮细胞损伤
【出 处】:
【作 者】:
乔艳婷
蒋静
章志丹
马晓春
中国医科大学附属第一医院重症医学科
辽宁沈阳110001
【摘 要】目的 明确中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对内皮细胞的损伤作用,探讨肝素能否减轻NETs诱导的内皮细胞损伤,发挥对内皮细胞的保护作用.方法 提取健康志愿者外周血,利用Percoll-Histopaque密度梯度离心法提取中性粒细胞(PMN),应用佛波酯(PMA)刺激PMN产生NETs,用免疫荧光染色联合荧光酶标仪对NETs进行定性及定量检测.用提取到的NETs诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并分别加入重组DNA水解酶(rhDNase)拮抗及肝素干预,6 h后应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定各组HUVEC活性.结果 PMA刺激PMN可以产生NETs,免疫荧光染色显示在PMN周围可形成网状结构.荧光酶标仪检测显示,与对照组比较,经PMA刺激的PMN上清液中游离DNA含量(μg/L)显著增加(2 h:119.62±14.83比24.27±0.67,4 h:146.67±21.24比28.35±2.98,均P〈0.05).应用NETs诱导HUVEC,随着NETs含量的增加内皮细胞抑制率逐渐上升,加入rhDNase后,NETs诱导的内皮细胞抑制率可被拮抗〔10、20、30μg/L NETs时内皮细胞抑制率分别为:(8.65±0.51)%比(10.99±0.35)%,(14.85±0.43)%比(16.85±0.49)%,(26.06±3.51)%比(27.54±0.62)%,均P〈0.05〕.在NETs诱导内皮细胞损伤后,加入0.01、0.1、1和10 kU/L肝素可明显降低细胞抑制率,且呈剂量依赖趋势,10μg/L NETs时内皮细胞抑制率分别为(8.96±0.70)%、(5.32±1.36)%、(0.70±0.30)%、(0.75±0.20)%比(10.99±0.35)%,20μg/L NETs时内皮细胞抑制率分别为(15.57±0.62)%、(13.28±0.65)%、(6.91±0.15)%、(5.86±0.17)%比(16.85±0.49)%,30μg/L NETs时内皮细胞抑制率分别为(30.49±0.74)%、(29.41±1.41)%、(23.45±0.75)%、(21.72±1.52)%比(27.54±0.62)%,且1 kU/L和10 kU/L的肝素对所有浓度NETs诱导内皮细胞抑制均有改善作用,差异均有统计学意义(均P〈0.05).结论 NETs能够诱导内皮细胞损伤,且NETs含量越高细胞损伤程度越重;肝
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