线粒体自噬在大鼠VILI中的作用及机制
【出 处】:
【作 者】:
荆忍
潘灵辉
广西医科大学附属肿瘤医院麻醉科
广西壮族自治区南宁530021
【摘 要】目的探讨线粒体自噬在呼吸机相关性肺损伤(VILI)中的作用及其机制。方法将36只SPF级SD大鼠按随机数字表法分为自主呼吸组(CON组)、正常潮气量(VT)组(NVT组,VT为8mL/kg)、大VT组(HVT组,VT为40mL/kg)3组,每组12只。所有大鼠均气管切开后行气管插管,CON组保持自主呼吸,NVT组和HVT组分别给予相应VT的机械通气。通气4h后收集血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本,测定肺组织湿/干重比值(W/D),分别于光镜和透射电镜下观察肺组织病理学改变和Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)超微结构改变;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清和BALF中白细胞介素(IL-1β、IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用BCA法测定BALF中总蛋白水平,并进行细胞计数;采用实时荧光定量反转录一聚合酶链反应(RT—qPCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)分别检测肺组织中微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、线粒体DNA编码的细胞色素C氧化酶Ⅳ(COX—IV)和核转录因子-κBp65(NF—κBp65)的mRNA及蛋白表达。结果CON组和NVT组肺组织及AECⅡ超微结构基本正常,HVT组则有明显的炎症性改变和病理学损伤。与CON组和NVT组比较,HVT组肺组织W/D比值明显升高(8.53±1.05比5.12±0.65、5.57±0.55,均P〈0.05),BALF中总蛋白、渗出细胞、IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显升高[总蛋白(g/L):2.35±0.45比1.46±0.34、1.76±0.51,细胞计数(×10^5/mL):2.05±0.48比0.40±0.08、0.60±0.23,IL-1β(ng/L):119.82±6.56比76.15±3.32、79.39±4.44,IL-6(μL):4.10±0.52比1.97±0.40、2.27±0.36,TNF—α(mg/L):1.49±0.28比0.43±0.23、0.61±0.24,均P〈0.05],血清IL-1β、IL-6和TNF—α含量明显升高[IL-1β(ng/L):127.53±7.10比79.40±2.80、82.95±2.25,IL-6(�
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