预牵张对体外培养机械牵张诱导人Ⅱ型肺泡上皮细胞γ-氨基丁酸信号通路活化的影响
【出 处】:
【作 者】:
罗科
周罗晶
黄天丰
郭唯真
高巨
扬州大学临床学院
苏北人民医院麻醉科
江苏扬州225001
扬州大学临床学院
苏北人民医院科教科
江苏扬州225001
【摘 要】目的评价机械牵张预处理对机械牵张诱导人Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)γ-氨基丁酸(GABA)信号通路活化的影响。方法体外培养人AECⅡ细胞株(A549细胞),分为对照组(C组)、机械牵张组(P1组)和机械牵张预处理组(P2组)。C组常规培养;P1组给予20%应变率的机械牵张6h;P2组给予5%应变率预牵张60min后,将应变率调整为20%继续牵张6h。采用甲基噻唑蓝法测定细胞活性;采用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养液中白细胞介素(IL-1β、IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)测定IL-1β、IL-6及TNF—α的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定谷氨酸脱羧酶(GAD)和γ-氨基丁酸A受体(GABAR)的蛋白表达。结果与C组比较,P1组细胞活性明显降低(A值:0.196±0.071比0.886±0.107),LDH释放率明显升高[(12.3±2.4)%比(1.9±0.5)%];细胞培养液中IL-1β、IL-6及TNF—α含量和mRNA表达量均明显升高[IL-1β(ng/L):138.6±19.7比32.7±7.4,IL-6(ng/L):196.5±31.7比55.4±13.8,TNF-α(ng/L):111.3±21.8比20.8±7.6;IL-1βmRNA(2^-△△CT):2.79±0.44比0.83±0.12,IL-6mRNA(2^-△△CT):1.99±0.25比0.56±0.11,TNF—α.mRNA(2^-△△CT):2.54±0.37比0.72±0.09];GAD和GABA。R蛋白表达均明显下调[GAD(灰度值):0.38±0.12比1.75±0.45,GABAAR(灰度值):0.29±0.09比1.68±0.39;均P〈0.05]。与P1组比较,P2组细胞活性明显上调(A值:0.523±0.132比0.196±0.071),LDH释放率明显降低[(6.9±1.7)%比(12.3±2.4)%];细胞培养液中IL-1β、IL-6及TNF—α含量和mRNA表达量均明显降低[IL-1β(ng/L):79.2±11.6比138.6±19.7,IL-6(ng/L):89.
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