微小RNA-1在高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化中的调控作用
【出 处】:
【作 者】:
王安
孙波
仇佳
乔世刚
王琛
苏州大学附属第二医院麻醉科
江苏苏州215004
苏州科技城医院麻醉科
江苏苏州215153
南京医科大学附属苏州医院西区麻醉科
江苏苏州215001
【摘 要】目的探讨微小RNA-1(miR-1)在高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化中的作用。方法取1-3日龄SD大鼠心尖组织培养原代成纤维细胞,选用3-4代细胞并随机分为正常糖空病毒组(CON+Lv-Vehicle组)、正常糖miR-1沉默组(CON+Lv-miR1组)、高糖空病毒组(HG+Lv-Vehicle组)、高糖miR-1沉默组(HG+Lv-miR1组)4组,分别置于含葡萄糖5.5mmol/L(正常糖)或25mmol/L(高糖)的DMEM培养基中,并分别接种含miR-1沉默序列的慢病毒或慢病毒载体,于12h后更换新鲜培养基。接种病毒3d后病毒转染效率达90%时,采用实时定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量,蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ、基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及自噬相关蛋白微管相关蛋白l轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)、死骨片重组蛋白1(P62/SQSTM1)、组织蛋白酶D(Cathepsin D)的蛋白表达。结果与CON+Lv-Vehicle组比较,CON+Lv-miR1组各指标差异均无统计学意义;HG+Lv-Vehicle组miR-1表达明显升高(2^△△Ct:1.82±0.17比1.00±0.04),胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量(mg/L:14.55±0.33比7.28±0.22,157.50±13.22比61.25±8.54)及表达量(灰度值:432.35±56.00比100.00±15.00,320.35±47.00比100.00±15.00)明显升高,MMP-2、MMP-9、LC3B-Ⅱ、P62/SQSTM1蛋白表达明显增高(灰度值:249.0±21.0比100.0±15.0,142.3±20.0比100.0±16.0,178±19比100±14,378.3±20.0比100.0±15.0),而CathepsinD表达明显降低(灰度值:60±14比100±10),差异均有统计学意义(均P〈0.01)。与HG+Lv-Vehicle组比较,HG+Lv-miR1组miR-1表达明显降低(2^△△Ct:1.21±0.10比1.82±0.17),胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量(mg/L:10.68±0.54比14.55±0.33,87.25±13.55比157�
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