通过抑制小窝蛋白磷酸化调控Nrf2信号通路可以对呼吸机相关性肺损伤起保护作用
【出 处】:
【作 者】:
钟荣
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肖军
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戴春光
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于志辉
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周吉
【摘 要】
【摘要】目的探讨在体动物抑制小窝蛋白-1(Cav-1)磷酸化是否可有效调节核因子E2相关因子(Nrf2)信号通路及下游效应分子表达,以及是否对呼吸机相关性肺损伤(VILI)起保护作用。方法将90只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为9组,每组10只:假手术组(Sham)仅做气管切开而不通气;保护性通气(PV)1h、2h组;大潮气量(VT)通气(40mL/kg)1h、2h组;酪氨酸蛋白激酶抑制剂PP,或罗格列酮(Rsg)预处理+大VT通气1h、2h组(PP2或Rsg1h、2h组)。两个预处理组分别于通气前1h腹腔注射PP2(15mg/kg)或灌胃Rsg(5mg/kg)。制模后处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),用伊文思蓝(EB)实验检测肺血管通透眭;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF—α)、转录激活因子蛋白1(AP-1)、核转录因子-KB(NF—KB)、白细胞介素-8(IL-8)水平。取肺组织,计算肺湿/干质量比值(W/D),光镜下观察肺组织病理学改变;用比色法测定髓过氧化物酶(MPO)活性;用反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测Nrf2mRNA表达;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测磷酸化小窝蛋白-1酪氨酸残基14(pCav-1-Y14)、Cav-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、紧密连接蛋白闭合蛋白-5(elaudin-5)蛋白表达及Nrf2在胞质和胞核中的蛋白表达;用免疫组化法检测PPARγ、claudin-5阳性表达。结果Sham组和PV组肺组织无明显病理学改变,两组各指标均无差异。大VT组肺组织损伤严重,肺W/D比值、EB含量、MPO活性和BALF中TNF—α、AP-1、IL-8、NF—KB水平较Sham组及PV组明显升高,pCav-1-Y14、Cav-1表达均显著高于Sham组及Pv组,PPARγ、elaudin-5表达则显著低于Sham组及PV组,并呈时间依赖性;胞核和胞质Nrt2表达与Sham组和PV组无统计学差异。PP2或Rsg预处理后,肺W/D比值、
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