微小RNA-101和微小RNA-125a-5p在脂多糖诱导人THP-1巨噬细胞自噬中的调控作用
【出 处】:
【作 者】:
许婕灵
[1] ;
张振辉
[2] ;
江慧琳
[1] ;
林佩仪
[1] ;
陈晓辉
[1]
【摘 要】
目的探讨脂多糖(LPS)诱导人THP-1巨噬细胞自噬过程中微小RNA-101和微小RNA-125a-5p(miR-101、miR-125a-5p)的调控作用。方法体外培养人白血病单核细胞THP-1,用佛波醇(PMA,50μg/L)诱导THP-1细胞48h分化成巨噬细胞,以0、250、500、1000μg/L梯度LPS刺激细胞12h,以转染试剂脂质体Lipofectamine RNAiMAX介导miRNA模拟物(miR—mimic)转染细胞,荧光显微镜下观察miRNA的转染效率。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的释放量;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞内自噬相关蛋白ATG4D、Beclin1、LC3Ⅱ的蛋白表达;采用定量反转录-聚合酶链反应(RT—qPCR)检测miR-101和miR-125a-5p的表达。结果①250、500、1000μg/L LPS刺激THP-1巨噬细胞12h后,TNF-α和MCP-1释放量较未用LPS刺激细胞显著升高[TNF—α(ng/L):1336.1±18.5、1340.6±24.8、1364.5±14.9比47.6±4.4,MCP-1(ng/L):996.3±51.3、934.6±84.3、974.2±69.5比21.3±6.5,均P〈0.01],但3个剂量组间无统计学差异。250、500、1000μg/L LPS刺激细胞12h后,细胞内ATG4D、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达均较未用LPS刺激细胞明显上调(ATG4D的t值分别为8.103、38.410、52.020,P值分别为0.015、0.001、〈0.001;Beclin1的f值分别为3.026、5.328、3.482,P值分别为0.047、0.034、0.037;LC3Ⅱ的t值分别为3.836、6.200、4.665,P值分别为0.018、0.003、0.010),以500μg/L LPS的效果最为明显。用500峨几LPS刺激细胞12h后,细胞内miR-101、miR-125a-5p的表达均较未用LPS刺激细胞显著下调[miR-101(2^-△△Ct):0.68±0.08比1.95±0.26,t=8.047,P=0.001;miR-125a-5p(2^-△△Ct):0.23±0.06比1.69±0.42,t=5.975,P=0.004]。②荧光显微镜下显示miRNA转染效率较高。Western Blot结果显示�
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