肝素通过核转录因子-κB信号通路减少脂多糖刺激人内皮细胞趋化因子的表达
【出 处】:
【作 者】:
李旭
[1] ;
马延全
[2] ;
陈恬璐
[1] ;
唐洁
[1] ;
马晓春
[1]
【摘 要】
目的观察肝素对脂多糖(LPS)刺激人内皮细胞分泌趋化因子水平的影响,探讨肝素对核转录因子--κB(NF-κB)信号通路的作用机制。方法体外培养人肺微血管内皮细胞株(HPMEC),取传代培养至第3—5代的细胞用于实验。将细胞分成对照组、LPS刺激组、1kU/L或10kU/L肝素+LPS组及NF-κB抑制剂甲苯磺酰赖氨酸氯甲酮(TLCK)组(TLCK+LPS组)。LPS刺激组加LPS10mg/L;不同剂量肝素预处理组于LPS刺激前15rain分别加入1ku/L或10kU/L的普通肝素;TLCK+LPS组于LPS刺激前30min加用TLCK10μmol/L;对照组加入与LPS等量的磷酸盐缓冲液(PBS)。各组于LPS刺激后1h收集细胞,采用免疫荧光法观察NF-κB核移位情况,以明确肝素对NF-κB的活化作用;LPS刺激后3h和6h收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定白细胞介素-8(IL-8)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平,以明确肝素对LPS刺激HPMEC产生趋化因子的影响以及对NF-κB信号通路的作用机制。结果①荧光显微镜下显示,对照组NF-κB大部分位于胞质中;LPS刺激组NF-κB由胞质向胞核转移明显增多;1kU/L和10ku/L肝素预处理均可明显抑制LPS诱导的NF-κB活化,以10kU/L肝素效果较好。②与对照组比较,LPS刺激后3h和6h细胞上清液中IL-8及MCP-1水平均明显增高[IL-8(ng/L):3h为387.1±26.4比23.8±8.1,6h为645.5±69.6比125.7±18.7;MCP-1(ng/L):3h为3654.9±467.9比721.6±61.3,6h为8178.5±792.6比1324.7±148.7,均P〈0.05];与LPS刺激组比较,1kU/L和10ku,IJ肝素预处理均可明显降低IL-8及MCP-1水平[IL-8(ng/L):3h为315.3±24.8、275.8±31.1比387.1±26.4,6h为557.8±43-3、496.9±38.7比645.5±69.6:MCP-1(ng/L):3h为2924.1±267.9、2668.3±522.6比3654.9±467.9,6h为7121.7±557.2、6563.9±576.4比8178.5±792.6。均P〈O�
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