调控对氧磷酶1基因对急性敌敌畏中毒小鼠肝氧化损伤的保护作用
【出 处】:《
中华危重病急救医学
》
CAS
CSCD
2015年第27卷第4期 285-290页,共6页
【作 者】:
郭瑞娟
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陈隆望
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连洁
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吴斌
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洪广亮
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葛赟
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刘瑶
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邱俏檬
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卢中秋
【摘 要】
目的:探讨调控对氧磷酶1(PON1)基因对急性敌敌畏中毒小鼠肝组织氧化损伤的保护作用。方法实验1:将12只雄性Balb/c小鼠按随机数字表法分为对照组、对照绿色荧光蛋白慢病毒(Lv-GFP)组、重组PON1慢病毒(Lv-PON1)组3组,每组4只。经尾静脉分别注射转染2×107 TU的Lv-GFP或Lv-PON1慢病毒,对照组给予等量生理盐水。分别于0、1、3、5、7、9 d取眼底静脉血,检测血清PON1活性;转染3 d取肝组织,分别用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹试验(Western Blot)检测PON1 mRNA和蛋白表达。实验2:另将96只雄性Balb/c小鼠按随机数字表法分为对照组、敌敌畏染毒组、Lv-GFP干预组、Lv-PON1干预组4组,每组24只。经尾静脉分别注射转染Lv-GFP或Lv-PON1慢病毒后3 d,腹腔注射敌敌畏溶液9 mg/kg染毒,对照组给予等量生理盐水。各组分别于染毒后6、12、24、48 h麻醉处死6只小鼠取肝组织,RT-PCR检测PON1 mRNA、核转录因子E2相关因子2(Nrf2) mRNA表达;Western Blot检测PON1蛋白表达;化学比色法检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量;双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性。结果实验1:Lv-PON1转染正常小鼠后,血清PON1活性逐渐升高,自3 d起维持在较高水平;而对照组和Lv-GFP组血清PON1活性均处于正常低水平状态。转染3 d肝组织PON1 mRNA和蛋白表达均显著高于对照组和Lv-GFP组。实验2:与对照组相比,敌敌畏染毒组染毒后6 h肝组织PON1 mRNA和蛋白表达、 Nrf2 mRNA表达、GSH、SOD、CAT水平即明显降低〔PON1 mRNA(灰度值):0.237±0.075比0.674±0.011,PON1蛋白(灰度值):0.602±0.086比0.998±0.124,Nrf2 mRNA(灰度值):0.089±0.012比0.126±0.010,GSH(mg/g):3.84±0.33比5.52±0.40,SOD(μg/g):0.383±0.040比0.564±0.052, CAT(ng/g):7.32±1.28比12.46±1
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