肝素通过Toll样受体4减少脂多糖刺激人内皮细胞粒细胞集落刺激因子的表达
【出 处】:《
中华危重病急救医学
》
CAS
CSCD
2015年第27卷第2期 81-85页,共5页
【作 者】:
李旭
;
刘一娜
;
马晓春
【摘 要】
目的 观察肝素对脂多糖(LPS)刺激人内皮细胞粒细胞集落刺激因子(G—CSF)水平的影响,并探讨Toll样受体4(TLR4)在其过程中的可能作用。方法 体外培养人肺微血管内皮细胞(HPMEC),取传代培养至第3。5代细胞用于实验。实验1:将细胞分为对照组、LPS刺激组(LPS 10μg/mL)、LPS+0.1U/mL肝素组和LPS+1U/mL肝素组4组,肝素作用组于LPS刺激前15min加入相应剂量普通肝素,对照组加入与LPS等量的磷酸盐缓冲液(PBS);于LPS刺激24h后收集细胞上清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定白细胞介素-6(IL-6)、G—CSF水平,以明确肝素对HPMEC的作用。实验2:另取细胞,分别于加入PBS或LPS前4h加入5μg/mL球形红细菌LPS(LPS—RS,一种TLR4拮抗剂);于LPS刺激24h后收集细胞上清,测定IL-6、G—CSF水平,以明确TLR4在LPS诱导HPMEC损伤中的作用。实验3:另取细胞,分为对照组、LPS刺激组、LPS+0.1U/mL肝素组和LPS+1U/mL肝素组,处理方法同实验1;于LPS刺激1h后收集细胞,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定TLR4蛋白表达,以明确肝素对TLR4的作用。结果 ①与对照组比较,LPS刺激组IL-6及G—CSF水平明显增高[IL-6(ng/L):655.9±58.3比75.5±18.2,G-CSF(ng/L):388.7±36.2比35.3±12.6,均P〈0.05];与LPS刺激组比较,0.1U/mL和lU/mL肝素预处理均可明显降低IL-6及G—CSF水-平(IL-6(ng/L):518.2±64.6、489.1±75.6比655.9±58.3,G—CSF(ng/L):298.8±41.0、273.4±33.2比388.7±36.2,均P〈O.05],两个肝素组间无明显差异,但以1U/mL肝素作用较明显。②LPS—RS可明显抑制LPS诱导的IL-6、G-CSF水平增高[IL一6(n∥L):139.1±37.6比655.9±58-3,G—CSF(ng/L):73.7±19.7比388.7±36.2,均JP〈0.05];而单独应用LPS—RS对细胞因子无明显影响[IL一6(ng/L
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