大鼠肺微血管内皮细胞通透系数检测的方法
【出 处】:
肺微血管内皮细胞
通透性
大鼠
transwell
电阻抗
【作 者】:
尤青海
;
高磊
;
岳扬
;
孙耕耘
【摘 要】目的探讨肺微血管内皮细胞(PMVEc)通透系数检测的实验方法。方法分别在transwell小室和聚碳酸酯纤维膜上构建大鼠PMVEC单层模型,用电阻抗仪和倒置显微镜观察到细胞单层汇合后,分别应用电阻抗仪监测跨内皮细胞电阻(TER),用异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖法检测通透系数(Pd),用Hanks平衡液法检测通透系数(助);同时观察脂多糖(LPS)刺激0.5h和2h后的PMVEC通透性变化,以测量值与其相应静息状态值的比值表示。结果倒置显微镜下观察到细胞接种后3d时已汇合成单层时TER值为(39.45±3.96)Q·cm2,Pd值为(8.52±0.50)×10cm/s;随细胞接种时间增加,TER值稳定升高,接种后4d达高峰[(49.84±3.93)Q·cm2]。静息状态下汇合成PMVEC单层的TER值、Pd值和却值分别为(49.84±3.93)Ω·cm2、(6.15±0.63)×10-6cm/s和(6.80±0.62)×10^-7cm·s-1·cm H2O-1。与未刺激组比较,10mg/LLPS刺激PMVEC0.5h和2h后,TER法测定的通透性均下降(0.87±0.03、0.45±0.04比1.OO±0.08),Pd法和功法测定的通透性均增加(Pd:1.33±0.11、2.43±0.14比1.00±0.10;Lp:1.30±0.07、2.38±0.15比1.00±0.11),差异均有统计学意义(均P〈0.05)。结论TER法、Pd法和坳法均能有效检测PMVEC通透系数,倒置显微镜联合TER和Pd法所测值更加精确,从而为体外研究急性肺损伤发病机制提供实验方法。
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