高氧所致氧化应激状态下肺泡上皮细胞Toll样受体的表达及其功能研究
【出 处】:
活性氧
肺泡上皮细胞
Toll样受体2/4
白细胞介素-6/8
【作 者】:
黄栋
[1] ;
方芳
[2] ;
许峰
[2]
【摘 要】目的观察高氧暴露后肺泡上皮细胞内活性氧(R0s)水平与Toll样受体(TLRs)基因、蛋白表达变化及其与信号通路功能之间的关系,探讨高氧所致肺损伤炎症反应的可能机制。方法将体外培养的人肺腺癌A549细胞株分为空气对照组、高氧组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理组;高氧组细胞在〉90%0。的高氧环境中暴露2、6、12、24及48h,NAC预处理组细胞予以ROS清除剂NAC预处理后高氧暴露6h。于相应时间点用流式细胞术检测细胞内ROS含量以及TLR2/4蛋白在细胞中的分布和表达;用逆转录-聚合酶链反应(RT—PcR)法检测TLR2/4mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中自细胞介素(IL-6、IL-8)的含量。结果A549细胞有TLR2/4表达,并且以细胞质内表达为主。与空气对照组比较,高氧组暴露2h细胞内ROS含量(荧光强度)即明显增高(11.820±3.123比7.223±1.170,P〈0.01),随高氧暴露时间延长呈进行性增高,于48h达高峰(113.837±5.247,P〈0.01);高氧暴露2hTLR2/4mRNA表达至高峰(TLR2mRNA:1.820±0.056比1.263士0.023;TLR4mRNA:2.080±0.220比1.317±0.107,均P〈0.01),随高氧暴露时间延长,TLR2/4mRNA表达虽仍有增多,但无显著变化;高氧暴露后TLR2/4蛋白表达显著增高,6h表达至高峰(TLR2蛋白:8.370±1.548比3.930±0.277;TLR4蛋白:25.803±5.783比8.867±2.230,均P〈0.01),以细胞质内表达为主;随高氧暴露时间延长,细胞上清液中IL-6(ng/L)、IL-8(ng/L)水平呈进行性增高,于48h达高峰(IL-6:2213.41±69.99比9.76±1.47;IL-8:11520.38±429.93比159.56±20.80,均P〈0.01)。在NAC预处理情况下,高氧刺激后,细胞内ROS水平明显降低(14.050±1.257比31.180±2.336,P〈0.01),细胞TLR2/4mRNA和蛋白表达显著降低(TLR2mRNA:1.270±0.061�
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